Effect of fresh frozen plasma on the in vitro activation of U937 monocytes: a potential role for the age of blood donors and their underlying cytokine profile

BACKGROUND: Fresh frozen plasma (FFP) administration may increase the risk of nosocomial infections in parallel with the development of immune modulation. This could be driven by soluble mediators, possibly influencing the in vitro activation of human U937 monocyte cells, in a manner dependent on the age of the donors. METHODS: FFP donors were stratified into groups of 19-30 years, 31-40 years or 41-50 years, and U937 cells were cultured with FFP (alone or plus lipopolysaccharide-LPS) for 24 h. Both in FFP and supernatants, TNF, IL-1ß, IL-6, and IL-10 levels were measured by ELISA. Additionally, CD11B, TLR2, and CASP3 gene expression were measured by qtPCR in U937 cells. Total phagocytic activity was also assayed. RESULTS: Elevated IL-10, but low TNF and IL-1ß levels were measured in FFP from individuals aged 19-40 years, whereas in individuals aged 41-50 years FFP were characterized by equalized TNF and IL-10 levels. Elevated IL-6 levels were found in all FFP samples, especially in those from the oldest individuals. FFP stimulation was associated with striking modifications in cytokine production in an age-dependent way. Exposure to FFP attenuates the response to LPS. TLR2 and CD11B expression were enhanced regardless of the age of plasma donors, although CASP3 expression was increased only when FFP from individuals aged 19-40 years were tested. Phagocytosis decreased after exposure to FFP regardless of donor age. CONCLUSION: Our results suggest that soluble mediators in FFP may modulate the functioning of monocytes. Interestingly, this effect appears to be partially influenced by the age of donors.

CD4 and CD8 T cell response to the rHSP60 from Klebsiella pneumoniae in peripheral blood mononuclear cells from patients with ankylosing spondylitis / Respuesta de linfocitos T CD4 y CD8 contra la rHSP60 de Klebsiella pneumoniae en células mononucleares de sangre periférica de pacientes con espondilitis anquilosa

Objective. To determine the processing pathways used by peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and present the rHSP60Kp, and the T cell subpopulations involved in the response, in patients with ankylosing spondylitis (AS) Methods. The lymphoproliferative response to the rHSP60Kp in PBMC from 14 HLA-B27 + AS patients and 15 B27 healthy controls was assessed by ³H-TdR incorporation. The processing pathways for the rHSP60Kp were analyzed by ³H-TdR incorporation in fresh PBMC from patients using homologous PBMC preincubated with the antigen and specific inhibitors: chloroquine, N-acetyl-L-leucil-L-leucil-L-nor-leucinal (LLnL) or brefeldin A (BFA), fixed with p-formaldehyde (fixed APC). The CD4+/CD8+ T cell subpopulation activated with the antigen was determined by three colours flow cytometry in PBMC from patients. Results. Eight out of fourteen patients showed positive lymphoproliferative responses to the rHSP60Kp while none of the healthy controls responded (p < 0.012). In five patients S.I. was above 4.0. In these patients lymphoproliferation was lower when chloroquine and LLnL was used and it became negative with BFA, indicating that both pathways are used. CD4+ and CD8+ T cells populations expressed CD69 when activated by the rHSP60Kp. Conclusions. Our results suggest that CD4 and CD8 T cells participate in the response to the rHSP60Kp in B27+ AS patients.

Objetivo.Determinar las vías utilizadas por las células mononucleares de sangre periférica (CMSP) de pacientes con espondilitis anquilosante para procesar a la rHSPGO de Klebsiella pneumoniae (rHSPGOKp) y las subpoblaciones de linfocitos T involucrados en la activación. Métodos. Se determinó la respuesta linfoproliferativa, por incorporación de ³H-TdR en CMSP, en presencia de la rHSPGOKp, en 14 pacientes con EA HLA-B27+y en 15 sujetos sanos HLA-B27-. La ruta de procesamiento y presentación de la rHSPGOKp se determinó por incorporación de ³H-TdR en las CMSP de los pacientes utilizando como células presentadoras a las CMSP homologas, preíncubadas con el antígeno y los inhibidores específicos: cloroquína, brefeldína A y N-acetil-L-leucil-L-leucil-L-nor-leucinal (LLnL), y fijadas con p-formaldehído. Se evaluaron las subpoblaciones de linfocitos T CD4+ y CD8+ que expresaron CD69, frente al antígeno, por citometría de flujo. Resultados. Ocho de los 14 pacientes y ninguno de los sujetos sanos, tuvo respuesta linfoproliferativa positiva (IE > 3.0) contra la rHSPGOKp (p < 0.012). En cinco de los pacientes el I.E. fue superior a 4.0. En estos pacientes la linfoproliferación disminuyó cuando se utilizó cloroquína y LLnL, y se hizo negativa cuando se utilizó BFA, lo que indica que ambas vías son empleadas. Las subpoblaciones de linfocitos T (CD4+ y CD8+) expresaron CD69 frente al antigeno. Conclusiones. Nuestros resultados sugieren que ambas poblaciones de linfocitos T: CD4+ y CD8+ participan en la respuesta a la rHSPGOKp.

Factor de necrosis tumoral-alfa e interleucina-1 ß en los comportamientos intravascular materno, fetal y retroplacentario en parto a término y pretérmino / Tumor necrosis factor-alpha and interleukin beta at maternal, fetal maternal intravascular compartments in term and preterm outcome

El nacimiento prematuro del neonato representa más de 80 por ciento de muertes perinatales, no atribuibles a malformaciones congénitas. A la fecha se desconocen las causas que originan el desencadenamiento de trabajo de parto pretérmino como a término. Evidencias experimentales involucran diversas citocinas inflamatorias en el inicio y/o mantenimiento del evento. El objetivo del trabajo fue determinar la concentración de TNF-alfa e IL-1beta en los compartimentos vasculares retroplacentario, fetal y materno en mujeres con embarazos a término y pretérmino que presenten trabajo de parto, y en mujeres con embarazos a término sin trabajo de parto. La determinación de las citocinas TNF-alfa e IL-1beta, se llevó a cabo mediante ensayos inmunoenzimáticos comerciales. Los resultados obtenidos de las citocinas aquí estudiadas, no mostraron diferencia estadística alguna (prueba t) al comparar los diferentes compartimentos intra e intergrupo. Sin embargo, la concentración de TNF-alfa muestra una tendencia a encontrarse en mayor proporción el ambiente fetal y retroplacentario, en los grupos con trabajo de parto (a término y pretérmino), comparada con el valor del grupo a término sin trabajo de parto. Del mismo modo, la concentración de IL-1beta mostró una tendencia de mayor concentración en los grupos de mujeres con trabajo de parto (a término y pretérmino), pero sólo en el compartimento retroplacentario. Las tendencias encontradas nos permiten proponer al compartimento retroplacentario y fetal, como los sitios blanco donde se sintetiza TNF-alfa e IL-1beta. Asimismo, la observación de la compartamentalización de ambas citocinas, parece indicar la existencia de un gradiente de síntesis que identifica al feto como productor inicial de TNF-alfa.

Factor de Necrosis Tumoral-alfa e Interleucina-1 beta en los compartimentos intravascular materno, fetal y retroplacentario en parto a término y pretérmino / Tumor Necros Factor-alpha and interleukin-1 at maternal, fetal and fetal-maternal intravascular compartments in term and preterm outcome

El nacimiento prematuro del neonato tiene asociado más del 80 por ciento de las muertes perinatales no atribuibles a malformaciones congénita. Hasta la fecha, se desconocen las causas que originan el desencadenamiento de trabajo de parto de término y pretérmino. Evidencias experimentales involucran diversas citocinas inflamatorias en el inicio y/o mantenimiento del evento. Objetivo. Determinar la concentración de factor de necrosis tumoral-alfa (TNF-Ó) e Interleucina-1 beta (IL-1ß) en los compartimentos vasculares retroplacentario, fetal y materno en mujeres con embarazos a término y pretérmino que presentaron trabajo de parto, y en mujeres con embarazos a término sin trabajo de parto. Material y métodos. La determinación de las citocinas TNF-Ó e IL-1ß se llevó a cabo mediante ensayos inmunoenzimáticos comerciales. Resultados. Los resultados obtenidos de las citocinas aquí estudiadas no mostraron diferencia estadística alguna (prueba t) al comparar los diferentes compartimentos intra e intergrupo. Sin embargo, la concentración de TNF-Ó muestra una tendencia a encontrarse en mayor concentración en el ambiente fetal y retroplacentario, en los grupos con trabajo de parto (a término y pretérmino), en comparación con el valor del grupo de embarazadas a término sin trabajo de parto. Del mismo modo, la concentración de IL-1ß mostró una tendencia de mayor concentración en los grupos de mujeres con trabajo de parto (a término y pretérmino), pero sólo en el compartimiento retroplacentario. Conclusiones. Las tendencias encontradas nos permiten proponer a los compartimentos retroplacentario y fetal como los sitios blanco donde se sintetiza TNF-Ó e IL-1ß. Asimismo, la observación de la compartamentalización de ambas citocinas parece indicar la existencia de un gradiente de síntesis que identifica al feto como productor inicial de TNF-Ó

Recognition of Streptococcus pyogenes and skin autoantigens in Guttate psoriasis

Background. Guttate psoriasis is associated with infections by Streptococcus pyogenes and cross-reaction between skin and streptococcal antigens have been reported, suggesting an autoimmune component in the disease. Methods. In this work, the authors looked for antibodies against S. pyogenes M-5 antigens by immunoblot in 52 sera of psoriasis patients and in 52 sera of normal individuals. Histological and immunohistochemical analysis in skin biopsies from lesions of another group of 16 clinically diagnosed guttate psoriasis patients and four healthy controls were also carried out. Results. All guttate psoariasis patients studied (11) had IgG antibodies that intensively recognized three different proteins of 70,60 and 14 kDa, as compared to sera from patients with other forms of psoriasis or from healthy controls. The diagnosis of psoariasis was confirmed in 14 of the patients by hematoxylin-eosin staining. Of the other two patients, one was diagnosed as parapsoriasis and the other as liquen. By indirect immunofluorescence (IFI), all 14 psoriatic patients had autoantibodies against their own lesional skin that did not recognized normal skin from control subjects or from the two non-psoriatic patients. The parapsoriatic and the liquen patients did not have autoantibodies. A rabbit immune serum against S. pyogenes antigens reacted with lesional skin from the 14 guttate psoriatic patients, but not with normal skin from controls or with lesional skin from the 2 non-psoriatic patients. Conclusions. The recognition by immunoblot of streptococcal antigens by serum of guttate psoriasis patients, the presence of autoantibodies against their own skin, and recognition of the same skin antigens by anti-streptococcal rabbit antibodies confirm the participation of the immune system and of streptococcal infection in guttate psoriasis

Antibody response to nitrogenase-positive and-negative Klebsiella pneumoniae strains in juvenile-onset ankylosing spondylitis patients and their first degree relatives: lack of differential recognition of the bacterial nitrogenase

En la búsqueda de las consecuencias patogénicas del mimetismo molecular entre la nitrigenasa de Klebsiella pneumoniae y el antígeno HLA-B27, se determinó la presencia de anticuerpos contra extractos completos de cepas de K. pneumoniae nitrogenasa positiva y negativa en el suero de individuos pertenecientes a 16 familias con casos de espondilitis anquilosante juvenil. Se hizo una selección inicial de cepas de K. pneumoniae productoras e nitrogenasa a partir de 31 aislamientos clínicos. Se buscó la mejor cepa productora de nitrogenasa así como una no productora y mediante inmunoelectrotransferencia se hizo un análisis del suero de 82 sujetos, de los cuales 55 fueron HLA-B27 positivos y de éstos, 26 mostraron alguna manifestación clínica. Aunque los patrones electroforéticos fueron diferentes con ambas cepas, no hubo reconocimiento distintivo o diferencial de las proteínas de 30 a 40 kDa donde se ubica el sub-componente de la nitrogenasa que tiene la secuencia QTDRED que se comparte con la molécula HLA-B27. Por otra parte, se encontró un fuerte reconocimiento de una proteína de 60 kDa (p60Kp) en el 75 por ciento de los sujetos HLA.B27 positivos, independientemente de su estado clínico. Actualmente se están realizando estudios para determinar la naturaleza de dicha molécula y su papel en la patogenia de la espondilitis anquilosante